Комплект быстрых испытаний на энтерогеморрагическую Эшерихио-коли EHEC по безопасности пищевых продуктов

1.Описание

Энтерогеморрагическая Escherichia coli(EHEC) представляет собой группуE. coliштаммы, способные вызывать геморрагическую диарею и энтерит у человека, причем наиболее репрезентативным штаммом является серотип O157:H7.сырое молоко, птицы и их продукты, а также фрукты и овощи, с говядиной, являющейся основным носителем передачи.

Данный продукт представляет собой сушеный в холодильнике реагент ПЦР в режиме реального времени.для выявлениеEscherichia coliO157:H7. Он использует высококонсервативные rfbE геныEscherichia coliO157:H7 как цель обнаружения. Это мастермикс, содержащий все необходимые ингредиенты, за исключением образцовой ДНК, и он предварительно распределяется в виде одного теста в трубках ПЦР для легкого использования.Этот продукт не требует холодной цепи для транспортировки и хранения, что значительно снижает расходы на доставку и исключает возможные потери в результате расхода реагента и загрязнения аэрозолями.

2Спецификации и состав

3. Хранение И срок годности

Хранитьпри окружающей температуре (5-30°C). Он стабилен до 12 месяцев.. После того, как вакуумная упаковка будет открыта, пожалуйста, храните неиспользованные продукты в поставленном полиэтиленовом пакете с осушителями.ив пакете из алюминиевой фольги. 

ОТВЕТ: 

Уменьшение размера гранула реагента указывает на проникновение влаги в трубку и на увлажнение реагента.Любые реагенты с значительно меньшим размером гранул, чем обычно, следует выбрасывать или тестировать с положительным контролем перед использованием. для испытаний проб.

4Требуется дополнительное оборудование и реагенты.

1)Инструмент ПЦР в реальном времени

2)Пипеттси чаевые

3)Нуклеаза-свободная вода

4)Комплект экстракции нуклеиновой кислоты

5Совместимые ПЦР-системы в реальном времени

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600 (в том числе и для автомобилей, имеющих двигатель с высоким давлением).

6Приемлемые образцы

Бульон для обогащения пищи, рвота, образцы диареи и т.д.

7. Процедура операции

1)ЯдерныеА.ВИЧЕвытягивание

ЭкстрактДНКиз образцов с использованием соответствующего комплекта экстракции.Рекомендуется:ДНКэлютируется примерно на 100μl элузионного буфера(ТЭ илиH без нуклеазы₂О)на последнем этапеэкстракция.Очищенную нуклеиновую кислоту следует использовать немедленно или хранить при температуре -20°C.

2)Подготовка к положительному контролю

Положительный контроль может храниться при температуре окружающей среды до регидратации. до 12 месяцев.Это...перед применением следует регидрироватьпутем добавления250μlиз буфера TE или nбез уклеазыH₂О,Использовать немедленно или хранить.при -20°C.

3)ПЦР в реальном времениМIXПвозмещение

А) Откройте вакуумную упаковку и вытащите 8-трубную полоску.сПроверьте, что гранул находится внизу трубки. (Сократите количество труб по мере необходимости еслинеобходимо)Если поставленные трубки не совместимы с вашим прибором, переместите реактивную гранулу в оптическую трубку, совместимую с вашим прибором.

B) Откройте трубки и выбросьте крышки (не подходят для ПЦР в режиме реального времени) и приготовьте реакционную смесь на льду, как показано ниже.

* В качестве отрицательного контроля может использоваться вода без нуклеазы.

В)Покрыть ПЦР покрышками (полосками), подходящими для ПЦР в режиме реального времени(не указано).

D) Вращаем трубки на низкой скорости в течение 10 ~ 15 секунд, и центрифугируем при 3000 оборотах в минуту в течение 20 секунд и помещаем их в инструмент ПЦР в реальном времени.

4)Настройка RT-PCR

Установите объем реакции на 25μl и процедуру усиления ПЦР, как ниже. флуоресценцию при 60°C и выберите NONE в качестве пассивного отсчета.

5)РезультатА.анализиЯ...Т.е.