LyoDt® Real-Time PCR Detection Kit For Salmonella Freeze - Dried Powder

 Набор для детекции Salmonella методом ПЦР в реальном времени LyoDt® в лиофилизированной форме

1. ВВЕДЕНИЕ

Salmonella - грамотрицательная энтеробактерия и распространенный пищевой патоген. Эти бактерии широко распространены в природе и часто колонизируют кишечник человека и животных, особенно птицы, домашнего скота и домашних животных. Основными пищевыми носителями для Salmonella являются: мясо и мясные продукты, яйца и яичные продукты, молоко и молочные продукты и т. д.

Этот продукт представляет собой лиофилизированный реагент для ПЦР в реальном времени для обнаружения Salmonella. В нем используется высококонсервативный ген invA Salmonella в качестве мишени для детекции. Это мастер-микс, содержащий все необходимые ингредиенты, за исключением ДНК-матрицы, и предварительно расфасованный в одноразовые ПЦР-пробирки для удобства использования. Этот продукт не требует холодовой цепи для транспортировки и хранения, что значительно снижает стоимость доставки и исключает возможные потери из-за отходов реагентов и аэрозольной контаминации.

2. СПЕЦИФИКАЦИИ И СОСТАВ

3. ХРАНЕНИЕ И СРОК ГОДНОСТИ

Хранить при комнатной температуре (5-30°C). Стабилен до 12 месяцев. После открытия вакуумной упаковки, пожалуйста, храните неиспользованные продукты в прилагаемом пластиковом пакете с возможностью повторного закрытия с осушителями и в алюминиевой фольге.

ПРЕДОСТЕРЕЖЕНИЕ:

Уменьшение размера гранул реагента является признаком попадания влаги в пробирку и увлажнения реагента. Любые реагенты со значительно меньшим размером гранул, чем обычно, следует утилизировать или протестировать с положительным контролем перед использованием для тестирования образцов.

4. ДОПОЛНИТЕЛЬНОЕ ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ

1) Прибор для ПЦР в реальном времени

2) Пипетки и наконечники

3) Безнуклеазная вода

4) Набор для выделения нуклеиновых кислот

5. СОВМЕСТИМЫЕ СИСТЕМЫ ПЦР В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600.

6. ПРИЕМЛЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Бульон для обогащения пищевых продуктов, рвотные массы, образцы диареи и т. д.

7. ПРОЦЕДУРА РАБОТЫ

1) Выделение нуклеиновой кислоты

     Выделите ДНК из образцов с помощью подходящего набора для выделения. Рекомендуется, чтобы ДНК элюировалась примерно 100 мкл элюционного буфера  (TE или безнуклеазная H₂O) на заключительном этапе выделения. Очищенную нуклеиновую кислоту следует использовать немедленно или хранить при -20°C.

2) Приготовление положительного контроля

Положительный контроль можно хранить при комнатной температуре до регидратации в течение 12 месяцев. Его следует регидратировать перед использованием, добавив 250 мкл буфера TE или безнуклеазной H₂O, перемешать на вортексе при низкой скорости в течение 15-20 секунд и центрифугировать при низкой скорости в течение 15-20 секунд. Использовать немедленно или хранить при -20°C.

3) Приготовление смеси для ПЦР в реальном времени

A) Откройте вакуумную упаковку и извлеките полоски из 8 пробирок, содержащие реагент. Убедитесь, что гранула находится на дне пробирки (при необходимости отрежьте необходимое количество пробирок). Если предоставленные пробирки несовместимы с вашим прибором, перенесите гранулу реагента в оптическую пробирку, совместимую с вашим прибором.

B) Откройте пробирки и выбросьте крышку(и) (не подходит для приборов ПЦР в реальном времени) и приготовьте реакционную смесь на льду, как показано ниже.

* Безнуклеазную воду можно использовать в качестве отрицательного контроля.

C) Закройте ПЦР-пробирки крышками (полосками), подходящими для ПЦР в реальном времени (не входят в комплект).

D) Перемешайте пробирки на вортексе при низкой скорости в течение 10–15 секунд и центрифугируйте при 3000 об/мин в течение 20 секунд и поместите их в прибор для ПЦР в реальном времени.

2) Настройка ПЦР-РВ

Установите объем реакции 25 мкл и процедуру амплификации ПЦР, как показано ниже. Соберите флуоресценцию FAM при 60°C и выберите NONE в качестве пассивного референса.

3) Анализ результатов и интерпретация